細(xì)胞增殖是活細(xì)胞的重要生理功能之一,是生物體的重要生命特征 ,是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控的因子下,通過DNA復(fù)制等反應(yīng),完成細(xì)胞分裂的過程。增殖檢測(cè)一般是分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化,進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長狀態(tài)及活性,細(xì)胞增殖檢測(cè)主要分為四類:DNA合成檢測(cè)、代謝活性檢測(cè)、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測(cè)和ATP濃度檢測(cè)。
細(xì)胞活性是判斷體外培養(yǎng)細(xì)胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標(biāo),如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養(yǎng)條件變化等。細(xì)胞活性檢測(cè)指標(biāo)通常包括細(xì) 胞膜對(duì)核酸染料的通透性、代謝活性、膜電位等。
細(xì)胞活性的檢測(cè)相當(dāng)于細(xì)胞增殖能力的測(cè)定,采用特殊的試劑測(cè)定細(xì)胞的代謝活力或細(xì)胞代謝產(chǎn)物,通過檢測(cè)細(xì)胞的氧化還原活性反映細(xì)胞增殖能力,屬于間接檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的方法。
下面簡單介紹一下MTT、MTS、CCK-8檢測(cè)的區(qū)別
MTT
MTT全稱 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽, 活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。對(duì)于細(xì)胞樣本加入MTT試劑反應(yīng),形成甲臜結(jié)晶。隨后加入二甲基亞砜(DMSO)重新溶解細(xì)胞中的甲臜,得到紫色混合液。用酶標(biāo)儀在490nm波長處測(cè)定其光吸收值。細(xì)胞存活率=(實(shí)驗(yàn)組吸光度值-空白組吸光度值)/(對(duì)照組吸光度值-空白組吸光度值)*99%。
CKK-8
Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝 基苯基)-3-(4-硝 基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

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